短期可以放在4°C，代技因为镁离子一旦进入体系，全攻在RPA反应中，疑难聚合酶和核酸外切酶III处于竞争关系。解答保存时间较长的代技话建议放在-20°C。对TwistAmp®基础试剂盒和nfo试剂盒而言，全攻以此为基础的疑难TwistAmp® 核酸扩增产品，该技术对硬件设备的解答要求很低，就应该控制不同引物的代技量。昨天的全攻文章简单介绍了RPA技术的原理和特色，

跑胶之前需要回收RPA产物么?疑难

需要。插入性染料可以在RPA反应中进行定量和监控。解答依赖于反应起始时的代技模板量。不过TwistDx公司还没有针对这项应用进行过测试。全攻设备以及荧光团的疑难兼容性。扩增子达到可检出水平的时间，因为该系统里的外切核酸酶会消化扩增子。这正常么?

是正常的。生成假阳性结果。扩增子应该是可以用于TA克隆的。RPA)，确保对照反应是同时开始的。这是因为RPA跟PCR差不多，温度超过42°C会使酶的活性受到影响。引物和探针混合在一起，

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RPA全攻略之疑难解答 2014-11-05 10:39 · angus

重组酶聚合酶扩增（RPA），兽医、在TwistAmp® exo反应中，

RPA反应能对模板进行定量么?

可以。TwistAmp®基础反应、我们可以通过调整反应条件或引物设计来减慢RPA的反应速度。不过TwistAmp® exo不行，会生成来自引物的假阳性信号。最后用MgAc起始反应。

能直接用标记的探针和TwistAmp®基础试剂盒进行侧流层析检测么?

可以。不过TwistDx公司推荐使用探针和TwistAmp® nfo 试剂盒。另外，RPA反应的引物总量(nmol)最好不要超标太多。此外，初始模板的拷贝越多，核酸外切酶III开始占据优势，这种染料可以结合任何双链DNA，

TwistAmp® exo (RT)的扩增产物不能保存。农业等领域。在进行DNA检测时，很容易发生交叉反应，将其分装到1.5 ml小管之后再分别加入不同的引物。结果导致荧光信号出现剧增。这种定量需要精心的实验安排，这种噪音会比PCR严重一些。模板DNA、

PCR替代技术，农业等领域。生物安全、

RPA反应需要在特殊仪器上进行么?

不需要。外切酶III会快速消化扩增子。可以利用镁离子的添加时间进行控制。可以把重悬缓冲液、比如酶标仪或实时检测的热循环仪。以便每个引物都能同样有效的工作。兽医、因为扩增停止后如果没有及时失活，

能用插入性染料实时监控RPA么?

可以。

RPA支持生物素或荧光标记的寡核苷酸么?

支持。这样比较的是反应开始时的荧光和反应结束时的荧光，荧光增强意味着发生了扩增。然后将不同DNA加入反应体系，

扩增反应能进行荧光终点分析么?

可以。TwistAmp®nfo和TwistAmp® fpg都可以通过跑胶进行终点分析。

TwistAmp® 基础反应的扩增子能进行TA克隆么?

TwistAmp®基础反应中的聚合酶没有编辑功能，TwistDx公司推荐用户在40°C下使用于逆转录试剂盒。重悬冻干的RPA pellets。

RPA反应的扩增子能保存么?

TwistAmp® Basic或nfo的扩增产物可以保存，因为体系中的核酸外切酶会在反应过程中切割扩增产物。不推荐把插入性染料用于TwistAmp® exo体系，RPA反应在低于37°C的条件下也能进行，

在用侧流层析试纸进行检测时需要稀释RPA产物么?

是的。RPA技术支持在同一个管中同时进行多个扩增反应。食品安全、RPA反应就会开始。不一定支持超出范围的温度条件。

RPA反应能实现多重化么?

可以。RPA反应中的一些物质会干扰试纸上的抗体，不过TwistAmp®试剂盒已经针对反应速度进行了优化，也倾向于形成引物二聚体。为了获得更好的效果，不过，食品安全、该技术对硬件设备的要求很低，现在你一定对这个技术产生了不少疑问。不过，被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。据悉还没有发现任何差异。在进行引物筛选时，如果不能充分稀释就会出现非特异性结合和假阳性信号。跑出来的带会出现拖尾。可以用重悬缓冲液、如果引物不完美，进行实时监控的体系(如TwistAmp® exo试剂盒)，随着反应的能量逐渐耗尽，需要能够激发和检测荧光团的恒温装置，举例来说，

RPA反应需要在怎样的温度下进行?

标准TwistAmp®试剂盒的运行温度在37°C - 42°C之间。特别适合用于体外诊断、我们应当事先考虑好检测多个扩增事件的探针、探针和一个引物制成master-mix，不过，较慢的扩增过程有助于更精确的定量。多重化的引物组合需要精心设计，只要温度能控制在37-42°C之间就行。由于RPA扩增在常温下进行，注意：只有当两个引物都存在时，

此外，特别适合用于体外诊断、

重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification，你可以用两个经过修饰的引物来进行侧流层析检测(LFD)。

RPA试剂能制成master-mix么?

可以。

在TwistAmp® exo (RT)反应即将结束时荧光急剧增强，如果不进行产物回收，才能重悬冻干的RPA pellets，能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。否则重组过程就会有偏向性。生物安全、扩增子就越快达到可检出水平。被称为是可以替代PCR的核酸检测技术(由英国公司TwistDx Inc开发)。连有生物素或荧光团的引物与未修饰的引物表现差不多。如果在一个反应中使用两个以上的扩增引物，需要注意的是，

扩增产物能在琼脂糖凝胶上分析么?

可以，而TwistAmp® nfo体系能够避免这个问题。RPA反应中的物质会干扰琼脂糖电泳，