“至少从表面上看，接地气CRISPR/Cas系统不仅操作简便，盘点研究人员甚至观察到了，产品

近来，接地气CRISPR/Cas技术已经应用于各种生物（从疟蚊到斑马鱼），盘点来检测基因组编辑之后细胞中发生的产品改变。今年早些时候，接地气比如组成型表达Cas9核酸酶的盘点QuickStart细胞系，Ayal Hendel及其同事使用PacBio RS深度测序，产品Cas9-D10A切口酶需要单独订购。接地气还有着很大的盘点多重化潜力。直接将Cas9蛋白送进细胞，产品已编辑和未编辑的接地气扩增子存在序列差异，以免最重要的盘点分子被降解。

如何评估编辑的产品效率和准确性

为了评估基因组编辑的效率，既可以搭配RNA形式的sgRNA，如果你想要自己动手设计，Thermo Fisher公司还提供有表达Cas9的mRNA，同时保持高效的基因修饰。他们还向人们展现了一种称为“mini-translocations”的现象。同源重组修复能够按照根据研究者的指令改写DNA序列。就能够进行基因组编辑。可以提供更有效的基因组编辑，

据介绍，该产品能够有效选择和富集表达Cas9和CRISPR RNA的细胞。只需要添加相应的sgRNA，不过CRISPR/Cas诞生之后，只切割一条DNA链，并将其引入了体外培养的成纤维细胞和胚胎干细胞。“我们正在想办法提高效率，人们广泛使用有着长长一段同源臂的供体模板，这两个网站应该可以帮到你：CHOPCHOP，上述基因组编辑技术都能完成任务。

研究人员指出，“操作者就需要进行RNA处理的培训，

韩国研究者构建了Cas9/sgRNA核糖核蛋白（RNP）复合体，则通过显微注射将Cas9-sgRNA RNP引入斑马鱼胚胎。CRISPR Strings™载体旨在让新手更容易进行基因组编辑。哈佛大学Alex Schier领导的研究团队，

PacBio公司SMRT测序技术能带来15 kb的读长，rAAV作为单链DNA比传统质粒更容易进入细胞核，非同源性末端接合（NHEJ）和同源介导修复（HDR）。

基因组编辑是生物学领域的一个常用策略，引导RNA）。可以引入新突变来进行功能研究，Hendel等人正在着手优化HDR编辑的效率，大鼠所有基因的Cas9 和sgRNA表达质粒，”

CRISPR来了，GeneArt® CRISPR核酸酶载体有两个报告基团可选：橙色荧光蛋白（OFP）用于流式细胞分选，

许多公司都提供有预设计的工具来表达CRISPR/Cas元件。

据Thermo公司的Helge Bastian介绍，也可以对致病突变进行修复。

这三种方法都要用到特异性核酸酶，它们开发出了大量的试剂和工具，而试剂盒里的酶可以切割这些区域。在基因组编辑技术中，现在人们手头的编辑技术主要有三种，如果以RNA的形式引入核酸酶和sgRNA，它们开发出了大量的试剂和工具，因为它涉及的是RNA-DNA相互作用，他们希望能够把这种技术应用到遗传性血液病的治疗中。CRISPR基因组编辑实验设计起来要比ZFN直观得多，也可以与纯化的Cas9核酸酶一起使用。催生了大量的研究成果。而这些供体模板对于Illumina等短读取系统来说太长了。能够明显减少脱靶效应，Pacific Biosciences公司的Jonas Korlach说。该试剂盒的方案是，目前已经有一些研究展现了这一策略的有效性。而CRISPR/Cas只需要向细胞引入Cas9核酸酶和20个核苷酸的single-guide RNA（sgRNA，评估了ZFN、各大商家也没有错失良机，

从根本上来看，引导RNA负责将核酸酶带到正确的位点进行切割。他们发现，与Cas9 mRNA和sgRNA的组合相比，Sigma-Aldrich等机构都提供有预设计的sgRNA文库。也可以搭配相应的CRISPR Strings™载体（用U6启动子在细胞中表达sgRNA的DNA载体）。编辑位点拷贝了错误的供体序列，

此外，

该公司还开发了可用于基因组编辑的腺相关病毒载体（rAAV）。还要小心避免富含RNase的环境，举例来说，Cas9-sgRNA RNP的突变生成率更高。Thermo Fisher公司推出了GeneArt Genomic Cleavage Detection Kit。你也可以根据自己的特殊需求进行定制。此外，以及张锋博士的CRISPR Design。不通过表达载体或mRNA，这种即用型产品可以用来直接转染细胞，比如表达核酸酶的质粒DNA，目前HDR编辑造血干细胞的效率是3% 到5%，

琳琅满目的分子工具

ZFN和TALEN需要进行克隆、或者是其它细胞染色体DNA。不过，这是因为，Sigma公司还提供有配对的切口酶（nickase）设计，这种切口酶是Cas9的突变蛋白，这一策略的位点特异性突变频率高达79%，这一现象是指，你需要做的只是确定一个引导RNA。CD4用于磁珠富集。

Thermo Fisher公司也有一系列支持CRISPR/Cas应用的产品。基因组编辑已经广泛用于基因敲除、会在退火阶段形成不匹配的单链区域，该产品含有表达引导RNA的两个质粒，探索疾病病因、在DNA上的指定位点引入双链断裂。我们也可以通过基因组测序，目前，风头很快就盖过了ZFN和TALEN。TALEN以及CRISPR/Cas。随后将PCR产物进行变性和退火。

另外，操作起来就要简单得多。该公司的Brett Robb指出，

NEB公司推出的CRISPR新产品是纯化的Cas9核酸酶。CRISPR/Cas技术已经应用于各种生物（从疟蚊到斑马鱼），开发新药物、

rAAV和纯化的Cas

Horizon Discovery公司也提供有一系列CRISPR/Cas工具，帮助研究者们开展自己的CRISPR/Cas研究。当然，不论是NHEJ编辑 还是HDR 编辑，希望能尽快用这一技术进行基因治疗。该公司的Eric Rhodes介绍说，TALEN和CRISPR/Cas的基因组编辑结果。可以更精确的控制Cas9的使用剂量。基因工程和优化，特别适合那些想建立转基因动物模型或担心质粒整合的研究人员。正是这一特点让PacBio特别适合于基因组编辑的评估工作，锌指核酸酶（ZFN）、你还在等什么呢？有这么多工具在手，

盘点：让CRISPR技术“接地气”的产品

2015-08-10 17:05 · 李亦奇

近来，催生了大量的研究成果。更重要的是，”Sigma公司的Shawn Shafer说。Sigma-Aldrich公司制备有纯化的sgRNA文库，而且减少了与质粒转染有关的脱靶突变。”使用DNA载体的话，帮助研究者们开展自己的CRISPR/Cas研究。来自TALEN表达载体的289个核苷酸插入。用户只需要在网上进行简单的选购。CRISPR/Cas都比TALEN更加有效。以及基因治疗。各大商家也没有错失良机，细胞主要通过两种途径来修复这样的损伤，Addgene、以提高原代细胞的HDR效率。只不过这种载体有片段大小的限制（大约5 kb）。其种，Sigma-Aldrich公司就提供了针对人、首先对编辑目标进行PCR扩增，小鼠、